기술응용자료
[응용자료 20] 'Mini-Extraction Sample Prep’과 ‘Poroshell 120’을 이용한 전 혈의 의약품… 크로마토그래피
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| 제조사 | Agilent(LC Column) | 첨부파일 |
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분석 개요
생물학적 matrix에서 의약품은 일반적으로 ADME (Absorption, Distribution, Metabolism, Excretion)와 임상 및 법의학 분석으로 결정된다. 분석을 위해 사용되는 주요 기술은 면역 측정법, LC, GC 이다. 그 중 Mass 스펙트럼 크로마토그래피법은 유연성, 선택 성, 감도, 질적 및 양적 기능에 따라 많은 응용이 가능 하기 때문에 분석 시 첫 번째로 선택 되는 방법이다.
생체 시료 중 약물 분석은 간단한 단백질 침전부터 복잡한 Solid-phase extraction(SPE)까지 시료 전 처리가 필요로 하는데, 고분자나 혼합 모드 SPE 흡착제로 소수 성 및 이온교환방법에 의해 산성, 중성 및 염기성 약물을 분리 할 수 있다.
응용자료에 제시된 실험은 항 응고제로 EDTA 또는 citrate 중 하나를 포함하고 있는 사람의 전 혈을 QeEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe sample preparation)원리를 응용한 Mini-extraction으로 nonbuffered와 buffered(AOAC, EN) salts로 전처리 한 후 LC/MS/MS로 분석하였다. 넓은 범위의 소수 성 및 해리 상수를 갖는 9개의 서로 다른 의약품을 사용 하였다. (lidocaine, tramadol, amitriptyline, biperidene, oxazepam, lorazepam, chlorpromazine, diltiazem, and naloxone)
본 실험은 Agilent Poroshell 120 Column으로 이용하여 효율적인 분석이 가능하게 하였다.
Agilent poroshell 120 Column은 0.5um의 frit을 사용하는 일반 컬럼과는 달리 poroshell 120 컬럼은 2um frit을 사용하기 때문에 filter를 하지 않은 plasma와 같은 시료를 분석할 때 막히는 단점을 보안한 컬럼이다.
분석 방법 및 분석결과
추출용매로서 ACN(0.4%, Formic Acid) 사용은 전 혈의 고체 덩어리가 다른 추출 용매에 비해 더 잘 용해되는 것을 보여 준다. ACN(0.4%, FA)을 추출용매로 사용 한 후, QuEChERS 염과 섞은 결과, AOAC 버퍼 염(E)의 사용은 시각적으로 가장 깨끗한 추출물을 산출하였고, 50mg SPA와 150mg MgSO4 포함한 d-SPE가 가장 적합한 실험법으로 선택되었다(E, H)
분석 결과
Matrix 간섭으로 의약품이 낮은 농도에서 관찰되었지만, SPE를 통하여 농축하여 저 농도까지 검출하였다
